羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
                                                                   使用说明书

【产品名称】

通用名：羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Goat Peste des Petits Ruminants Virus （ELISA）

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【预期用途】 小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）引起的一种急性接触性传染病，其特征

为口腔、舌粘膜糜烂、流泪、流鼻液。本病的易感动物为山羊，也可感染绵羊、白尾鹿等，但对牛无感染性。

本试剂用于检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体，可用于小反刍兽疫疫苗免疫效果评价。

【原 理】

本试剂盒系由预包被小反刍兽疫病毒重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测羊血清、血浆样本中小反刍兽疫病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有小反刍兽疫病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有小反刍兽疫病毒抗体。

【试剂盒组成】

【储存及有效期】 储存于阴凉干燥处（2-8℃），有效期期 12 个月。

包被板开封后请于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为 2 个月。

【适用仪器】 含 450nm、630nm 波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品 1 周内可于 2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按 40 倍稀释（如 5μl 血清加入 195μl 样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温 30 分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照 1 孔、阴性/阳性对照各 2 孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液 100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品 100μl。

4.混匀，置 37℃（推荐水浴）反应 30 分钟。

5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，拍干。

6.每孔加酶标记物 100μl（空白孔除外）。置 37℃反应 30 分钟。

7.洗涤，同步骤 5。

8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混匀，37℃避光反应 10 分钟。

9.每孔加终止液 50μl，混匀，于 450nm(可用 630nm 作参比波长）测定各孔吸光值（A 值），无参比波长用空白孔调零(即所有孔吸光值减去空白孔吸光值)。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.10，阳性对照≥0.6。

【检验结果的解释】

1.样品 A 值≥0.38 为阳性；样品 A 值在 0.2 到 0.38 之间为可疑；样品 A 值＜0.2 为阴性。

2.本实验结果为阴性或可疑时表明羊只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

该试验仅作为定性检测羊血清、血浆中小反刍兽疫病毒抗体，根据 A 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。