四环素类检测试剂盒使用说明书
（酶联免疫法）
 1 原理及用途
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的四环素类药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗四环素类药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含四环素类药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中四环素类药物的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：0.05ppb(ng/ml)
2.2 反应模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 检测下限：
组织、肝脏、鸡蛋………………0.3ppb
蜂蜜………………………………2ppb
尿样………………………………0.5ppb
2.4 交叉反应率：
四环素………………………………100/%
二甲胺四环素………………………125%
吡四环素……………………………110%
金霉素………………………………100/%
脱甲基金霉素………………………35%
土霉素………………………………58%
强力霉素……………………………45%
 2.5 样本回收率：
组织、肝脏、鸡蛋…………85±20%
蜂蜜…………………………75±20%
尿样…………………………80±20%
3 试剂盒组成
酶标板………………………96孔
标准品（黑盖）：各1ml
0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
高标准品（黑盖）：1ppm…………1ml
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液A（白盖）……………………6ml
底物液B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
5X复溶液（黄盖）…………………50ml
说明书………………………………1份
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：单道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl
4.3 试剂：三氯乙酸、甲醇
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液：
配液1：1%三氯乙酸溶液
    称取1g三氯乙酸加去离子水100ml溶解。
配液2：复溶液
    将5×复溶液用去离子水5倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 组织、肝脏、鸡蛋样本处理方法（不用过柱）
1）用均质器均质组织、肝脏、鸡蛋样本；
2）称取2±0.05g样本于50ml离心管中，加入6ml 1%三氯乙酸溶液，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；
3）取出1ml上清液于另一试管中，加入1m甲醇，振荡1min，室温4000r/min以上，离心10min；
4）取1ml上清液在50-60℃氮气或空气吹干，加入1ml复溶液溶解残留的干燥物；
5）取50 μl用于分析。
    样本稀释倍数：6    检测下限：0.3ppb
5.3.2 蜂蜜样本处理方法
1）准确称取1±0.05g蜂蜜样本于离心管中，加入2ml 1%三氯乙酸，振荡2min，室温4000r/min以上，离心10min；
2）取出100ul上清液于另一试管中，加入1900ul复溶液稀释，混合30s；
3）取50μl用于分析。
    样本稀释倍数：40    检测下限：2ppb
5.3.3 尿样本的处理方法