通用名称：禽腺病毒(FADV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)

Name ：Fowl Adenovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：25T/盒、50T/盒

预期用途：

禽腺病毒(Fowl Adenovirus, FADV)是无囊膜、线性双股 DNA 病毒,属于腺病毒科、禽腺病毒属成员。该病毒可感染鸡、火鸡及其他禽类。FADV 可致鸡发生包涵体肝炎、心包积水综合征和肌胃糜烂等疾病。该病常与禽类其他病原混合感染,感染鸡只可继发再/生/障/碍/性贫/血、肝炎及产蛋量下降等。FADV 呈 性分布,病毒可经粪-口途径水平传播,也可垂直传播,给养禽业造成巨大经济损失。

本试剂盒适用于检测呼/吸/道分泌物棉拭子（感染 I 群禽腺病毒的鸡、火鸡、鹅、鹌鹑）、卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织、泄殖腔拭子（感染 II、III 群禽腺病毒的鸡、鸭）等样本中的禽腺病毒，用于禽腺病毒感染的辅助诊断。

检验原理：

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对禽腺病毒特异性引物，结合一条特异性探针， 用荧光 PCR 技术对禽腺病毒的核酸进行体外扩增检测，用于临/床/上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂组成：

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

储存条件及有效期：

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

适用仪器：

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

标本采集：

病死禽取卵巢、输卵管、卵泡、子宫和输卵管粘膜组织；活鸡取呼/吸/道拭子或泄殖腔拭子，放于 1mL 50%

甘/油生理盐水中

保存和运输：

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

使用方法：
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
组织样品：称取样品约 1g，手/术/剪剪碎混匀后，于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；泄殖腔拭子直接取 100μL 提取
1.2 核酸提取
推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请    按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 FADV 反应液 酶液
用量（样本数为 N） 20μL 1μL
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，请勿选择 ROX 参比荧光。
4.3 推荐循环参数设置：
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycles 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35 阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
7.1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
7.2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
7.3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
7.4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
7.5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
7.6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症/状以及其他检测手段。